TECHNICAL COLUMN
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1.琼脂糖电泳,将特异电泳带用刀切下放入到 EP 管中,称琼脂糖带的重量;
2. 按照每100mg 加 400?l 的量加入binding buffer,放入到 EP管振荡器中,45℃~55℃温育振荡,直到所有的琼脂糖都溶解(大概要 5 分钟);
3. 取出纯化柱,将上述溶解液转移至柱中,室温下放置 2 分钟,8,000rpm 离心1 分钟,弃 EP 管中的液体,将纯化柱放回 EP 管中;
4. 加 500?l 的 wash buffer 至柱中,8,000rpm 离心 1 分钟。弃管中的溶液;
5. 重复操作 4 步的操作 1 次,最后将纯化柱放入 EP 管中 10,000rpm 离心 30 秒,除去痕量的 wash buffer;
6. 将纯化柱放入一个新的 EP 管。加 30~40?l H2O 或者 elution buffer 至纯化柱膜的中央,在37℃或 50℃下放置 2 分钟,10,000rpm 离心 1 分钟洗脱 DNA,将EP 管中的 DNA 溶液放在-20℃保存。
7. 注:若想要不电泳而直接纯化 DNA 溶液,只需要在第 2 步中按 100?l 液量加400?l 的 binding buffer,其余的步骤不变。
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