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  • 缓冲液和储备溶液(免疫组化/免疫细胞组化)

    8% 多聚甲醛溶液配制时应60°C 加热搅拌(温度不要超过60°C)。溶液达到60°C 时多聚甲醛溶解,加入500ml 0.2mM 磷酸盐缓冲液,使0.1mM 磷酸盐缓冲液中含4% 多聚甲醛。小心滴加1 当量的氢氧化钠溶液直至溶液澄清(每500ml 滴加1 至2 滴;如果仍未澄清,可继续滴加。或者,可在1 至2L 溶液中加入2 粒固体氢氧化钠)。溶液变冷后过滤。

    2021-05-10 浏览量:
  • 缓冲液和储备溶液

    三乙醇胺-吐温缓冲液(含0.1% 的吐温20)
    配制1L 溶液:取100ml 10 倍三乙醇胺缓冲液加890ml 超纯水,再加入10ml 吐温20 (10%)吐温20 很粘稠会粘在量取的枪头上,要确定加入三乙醇胺缓冲液的变性剂体积足够。建议使用10% 的溶液进行配制,会比用未稀释的吐温20 溶液容易配制。

    2021-05-10 浏览量:
  • 染色质免疫沉淀—ChIP 疑难解答

    无特异性抗体对照时出现背景过高与蛋白A 或G 非特异性结合应采用预清除处理,即在加入抗体前,将裂解的样本与磁珠混合1小时然后分离使用。

    2021-05-10 浏览量:
  • 染色质免疫沉淀—交联染色质免疫沉淀(X-ChIP) 操作步骤

    染色质免疫共沉淀是一种强力的手段,来联系蛋白质或其修饰位点与基因组的关系。染色质分离并用特异性抗体判断是否与特异性DNA 序列相结合。染色质免疫沉淀法亦可用来检测目的位点在基因组中的时空分布(用芯片或DNA 测序)。本操作规程详细阐述了交联染色质免疫沉淀(X-ChIP) 实验的具体步骤。

    2021-05-10 浏览量:
  • 免疫沉淀疑难解答

    离心后立即去除上清。沉淀中留有不溶性蛋白质,如果再次有悬浮发生,再次离心。

    2021-05-10 浏览量:
  • 免疫沉淀-用DMP 如何把抗IgM 抗体与蛋白A 或G 涂层的珠子耦合

    此方法涉及抗IgM 抗体的IgG 耦联蛋白A 或G 珠子(方法见下文)。这些珠子就可以在常规免疫共沉淀程序中使用IgM 抗体。通过结合抗-IgM 抗体,IgM 可以间接结合珠子。

    2021-05-10 浏览量:
  • 免疫沉淀—如何用IgM 抗体进行

    为了使洗脱蛋白较少污染抗体,也为了更纯净蛋白质的制备和干净的免疫印迹实验,推荐将抗体与珠子交联。下面是一个实验程序举例(几个网站有关于这个程序有很多信息)。目标蛋白应该用温和的洗脱液洗脱,如甘氨酸缓冲液。

    2021-05-10 浏览量:
  • 免疫沉淀-选择合适的微珠和使抗体与微珠交联的步骤

    为了使洗脱蛋白较少污染抗体,也为了更纯净蛋白质的制备和干净的免疫印迹实验,推荐将抗体与珠子交联。下面是一个实验程序举例(几个网站有关于这个程序有很多信息)。目标蛋白应该用温和的洗脱液洗脱,如甘氨酸缓冲液。更详细的缓冲液配方可在缓冲液章节找到,第71页。

    2021-05-10 浏览量:
  • 免疫沉淀-裂解物的预清除程序和免疫沉淀

    裂解物预清除可以帮助减少蛋白质非特异性结合到agarose (琼脂糖)或Sepharose beads (凝胶琼脂糖珠)。用无关抗体或血清预清除,可去除蛋白质与免疫球蛋白的非特异结合。最终实验结果背景降低并且信噪比提高。但是,如果最后蛋白质是由免疫印迹实验检测,预清除未必必要,除非是污染蛋白质对目的蛋白质产生明显干扰。

    2021-05-10 浏览量:
  • 免疫沉淀-裂解缓冲液和裂解物制备

    免疫沉淀是一种纯化蛋白质的方法。将我们感兴趣的一种蛋白质的抗体与细胞提取液孵育,以使抗体和蛋白质在溶液中结合。然后用蛋白A/G 耦合的琼脂糖凝胶,从样品中将抗体/抗原复合物提取出来。这种物理方法可将所需蛋白质从样品中分离出来。然后样品可以通过SDS-PAGE 分离出来进行Western blot 分析。

    2021-05-10 浏览量:
  • 流式细胞术—抗体染色方法和选择合适的荧光色素偶联物

    直接免疫荧光染色时,细胞与直接偶联有荧光染料(如 FITC 标记)的抗体孵育。这种方法的优点在于只需要一步抗体孵育,从而排除了二 抗非特异性结合的可能性。这对细胞内染色特别有用,因为包含二抗的大抗体荧光复合物有可能被困住,造成非特异性结合甚或无法进入细胞,而使一抗检测不到。

    2021-05-10 浏览量:
  • 流式细胞术—散射光和荧光的检测

    用于对靶蛋白进行检测/染色的荧光染料被相应激发波长的激光激发时将发出光线。那些被荧光标记了的颗粒或细胞,可以个别检测和分析。

    2021-05-08 浏览量:
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